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布病试管凝集试验的操作

信息来源:本站  浏览次数:37  发布时间:2022-07-11

针对客户在使用哈药疫苗布氏菌病试管凝集试验抗原产品时,总是出现不会操作及操作不当的问题,导致试验结果不理想,现整理了布病试管凝集试验的操作过程,供广大客户参考。

一、 实验前准备

1、 试管的准备

① 把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟,浸泡后用试管刷将其刷干净。先用自来水冲洗10遍,再用去离子水冲洗1遍。

② 试管冲洗干净后倒置于篮子中,等水沥干后置干燥箱中,160℃干燥3个小时。

③ 实验前准备0.5%的石炭酸生理盐水。

2、试剂的准备

①标准抗原:按照说明书使用。使用时充分摇匀,用稀释液作1:20(工作浓度)稀释。

②标准阳性血清冻干品,使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

③标准阴性血清冻干品,使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

3、被检血清

①按常规方法采血分离血清

血清必须新鲜,无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。

②运送和保存血清样品

防止血清冻结和受热,以免影响凝集价。

二、试验操作过程

1、确定被检血清的稀释度

牛、马、骆驼稀释用1:50,1:100,1:200,1:400(4个稀释度);猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,1:100,1:200(4个稀释度)。大规模检疫时也可用2个稀释度,即牛、马、骆驼用1:50,1:100,猪、山羊、绵羊和狗用1:25,1:50,为测定强阳性血清效价,稀释度可以增加。

2、稀释被检血清—猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释。

①每份被检血清用4支试管,标记检验编号后第I管加1.15 mL稀释液,第2-4管各加人0.5 m L稀释液。

②取被检血清0.1 mL,加人第1管,充分混匀后吸弃0.25 mL。

③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管,混合均匀后,再从第2管吸取0.5 m L至第3管,如此倍比稀释至第4管,从第4管弃去0.5 mL,稀释完毕。

④从第1至第4管的血清稀释度分别为1:12.5,1:25,1:50,1:100。

3、加抗原

将0. 5 m L抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中,并振摇均匀,猪、羊或狗的血清稀释则依次变为1 : 25,1 : 50,1 : 100,1:200,牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为1:50,1:100,1:200,1:400。各反应管反应总量为1 mL。

4、设立对照—每次试验都应设立下列对照。

①阴性血清对照

阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。

②阳性血清对照

阳性血清的最高稀释度应超过其效价滴度,加抗原的方法与被检血清同。

③抗原对照

在0. 5mL稀释液中,加0.5 m L抗原(1:20)

5、比浊管的配置

每次试验均须配制比浊管,作为判定凝集反应程度的依据,先将抗原(1: 2 0)用等量稀释液作一倍稀释,然后按表1配制比浊管。

 

                                                                            表 1比 浊 管 的 配 制

 

6、感作(反应)

所有试验管充分震荡后,置37℃温箱感作20小时。

7、结果判断

确定每份被检血清效价:比照比浊管判读,出现++以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。

① 结果判定

当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集,阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度,则证明试验成立,可以判定。否则,试验应重做。

②牛、马和骆驼于1:100。血清稀释度,猪、山羊、绵羊和狗于1:50血清稀释度出现“++”以上的凝集现象时,被检血清判定为阳性反应。

三、试验后的处理

1、试管的处理

把所用试管必须高压处理(121℃高压30分钟),然后用自来水彻底洗涮干净,再用去离子水冲洗,后放置框中沥干,干燥(160℃干燥3个小时),保存备用。

2、 配置好而未用完的抗原及其盛装其瓶子的处理

瓶子连其抗原一同高压灭菌(121℃高压30分钟),后清洗干净以备用。

3、 试管架的处理

把试管架上带有样品标记的符号用无水乙醇彻底清除掉,后用自来水把试管架冲洗干净,晾干、保存备用。

四、哈药疫苗布氏菌病试管凝集试验产品

   规格:

抗原:10 ml/瓶

阳性血清:1.0 ml/瓶

阴性血清: 2.0ml/瓶

包装:

5瓶/盒、10瓶/盒、20瓶/盒。

贮藏与有效期:

抗原2~8℃保存,有效期为18个月。期满后测定效价,如果符合标准,可延长6个月。 

阴、阳性血清液体制品2~8℃保存,有效期阳性血清为12个月,阴性血清为24个月;冻干制品8℃以下保存,有效期均为120个月。

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