本试验为分析免疫质量，及时掌握流行病学动态和免疫效果，我公司在河北省石家庄市和邢台市选取两个蛋鸡场，对我公司重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)抗体的血清学进行连续性的监测，以此掌握我公司重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株) 抗体消长规律、产生时间、抗体高度及持续时间等效果。

1 材料和方法

1.1 供试材料

澳门威斯尼斯人娱乐9499重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)灭活疫苗。

抗体监测试剂 禽流感H5N1 Re-7株和Re-6株抗原及阳性血清，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供，红细胞悬液是澳门威斯尼斯人娱乐9499质量管理部提供的SPF级公鸡红血球。

1.2 疫苗效力检测

取4周龄SPF鸡35只（由澳门威斯尼斯人娱乐9499SPF鸡场提供），分成两组，一个实验组，每组20只，对照组15只，实验组注射澳门威斯尼斯人娱乐9499禽流感H5亚型二价灭活疫苗，每只肌肉注射疫苗0.5ml。21日后，实验组、对照组分别采血，分离血清，分别用国家禽流感参考实验室提供的针对禽流感病毒Re-6株和Re-7株免疫抗体的2种H5亚型抗原测定HI抗体。

1.3试验鸡群

选择4周龄未经禽流感疫苗免疫的商品蛋鸡（海兰白）在河北省石家庄(A场)和邢台市（B场）两个蛋鸡场（15000羽左右），免疫澳门威斯尼斯人娱乐9499禽流感H5亚型二价灭活疫苗。鸡群在同一管理条件下进行饲养。

1.4 免疫剂量及方法 按照种鸡场提供免疫程序，实验组于4周龄首免，颈部皮下注射0.3 mL／羽；8周龄二免，胸部肌肉注射0.5 mL／羽。

1.5 HI抗体效价测定 鸡群于4周龄（首免当天）、6周龄、7周龄、8周龄(二免当天)、9周龄、10周龄、12周龄、14周龄、17周龄、20周龄、23周龄、26周龄，每组随机选取150只鸡翅静脉采血，离心制备血清并按照国家标准红细胞血凝抑制试验( HI )进行抗体检测。

1.6检测试剂和检测方法

试验均用国家标准红细胞血凝抑制试验( HI )进行抗体检测，待检血清HI抗体滴度大于或等于6log2时为抗体合格。 

2 结果

2.1疫苗效力检验结果见表1，对照组为阴性，免疫鸡Re-6株、Re- 7株HI抗体几何平均滴度（GMT）≥6log2为合格产品。

表1 疫苗效力检测结果（log2）

2.2 石家庄与邢台市两个蛋鸡场免疫疫苗后，均未见明显不良反应，鸡群状态良好，测定鸡群禽流感Re-6株、Re-7株HI抗体效价，并分别计算平均值，结果见表2，绘制抗体消长折线图，见图1、图2。

表2 禽流感H5N1亚型Re-6株及Re-7株HI抗体效价监测结果（log2）

由图1、图2可见，四周龄雏鸡禽流感母源抗体为零或极低，首免后2周，A场组、B场组Re-6株、Re-7株抗体效价达到6log2，3周各组均达到首免后的抗体高峰，Re-6株抗体6.9~8log2，Re-7株抗体8~8.4log2。首免高峰后抗体效价出现下降趋势，于8周龄二免后，三个实验组抗体效价迅速上升，其中A场组抗体效价上升速度最快，6周后（14周龄）达到二免抗体高峰且峰值最高，Re-6株抗体达到11.6log2，Re-7株抗体达到11.4log2；B场组抗体上升速度、峰值次之，于二免后9周达到抗体高峰。达到峰值后各实验组抗体效价平稳下降，二免后18周，A场组与B场组Re-6株、Re-7株抗体效价略高于6log2，二免后合格抗体可持续16~18周。

2.3 抗体显著性检验（t 检验）A场与B场采样点之间差异显著(P<0.05)，A场与B场差异不显著（P>0.05）。

3 讨论

鸡群HI抗体效价几何平均数达到4log2可判定为免疫合格，据有关资料，HI抗体效价达到4log2时有保护力，但有时能分离到病毒，当达到5log2以上时，可完全保护，并且分离不到病毒。综合考虑现地实际与灭活疫苗抗体产生规律，对于商品蛋鸡，现地应用中以6log2作为抗体合格值及免疫临界值为宜。

在现地应用中，个别养殖户及养殖场不重视禽流感疫苗的免疫，在商品蛋鸡开产前仅进行一次或两次重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗( H5 N1，Re-6株+ Re- 7株)免疫，本次试验由于现地条件限制，仅进行了两次禽流感疫苗免疫，由实验数据可看出，商品蛋鸡在开产前进行一次免疫，抗体峰值较低且下降较快；若进行两次免疫，二免合格抗体可持续16~18周左右，这意味着产蛋鸡群在5~6月龄产蛋率上升期及高峰期，HI抗体效价将降至免疫临界值，如果此时进行加强免疫将对产蛋率产生较大影响。因此根据试验结果建议商品蛋鸡在开产前进行三次H5型禽流感疫苗免疫，15~30日龄进行首免，45~60日龄进行二免，开产前进行三免，按照此程序，合格抗体可较好的保护产蛋高峰期。建议有条件的鸡场在产蛋期定期进行禽流感HI抗体监测，根据监测结果及时进行免疫，同时也应做好H9型禽流感疫苗免疫。